核酸雜交(Nucleicacid hybridization)，又稱核酸分子雜交。
威尼德分子雜交儀原理：是核酸變性和復(fù)性理論。雙鏈的核酸分子在某些理化因素作用下雙鏈解開(kāi)形成單鏈，當(dāng)理化因素消除后，具一定同源性的兩條(探針和待測(cè)核苷酸序列)單鏈在適宜的溫度及離子強(qiáng)度條件下，可按堿基互補(bǔ)配對(duì)原則特異性地復(fù)性形成雙鏈。核酸分子雜交可在DNA與DNA、RNA與RNA或RNA與DNA的二條單鏈之間進(jìn)行。
分類：核酸分子雜交按作用環(huán)境不同分為固相核酸分子雜交和液相核酸分子雜交。
一、固相核酸分子雜交
原理：將參加反應(yīng)的一條核酸鏈先固定在固體支持物上，另一條游離在溶液中。固體支持物有硝酸纖維素濾膜、尼龍膜、乳膠顆粒、磁珠和微孔板等。固相雜交時(shí)，未雜交的游離片段很容易漂洗除去，膜上的雜交物容易檢測(cè)并能防止靶DNA自我復(fù)性，故該方法最為常用。 常用類型：菌落原位雜交、斑點(diǎn)雜交、狹縫雜交、Sou thern blot雜交、Northern blot雜交、組織原位雜交和夾心雜交等。
基本操作步驟：
1、制備樣品：從待檢測(cè)組織樣品中提取DNA或RNA。DNA應(yīng)先用限制性內(nèi)切酶消化以產(chǎn)生特定長(zhǎng)度的片段，然后通過(guò)凝膠電泳將消化產(chǎn)物按分子大小進(jìn)行分離。再將含有DNA片段的凝膠進(jìn)行變性處理后，直接轉(zhuǎn)印到支持膜上并使其牢固結(jié)合。這樣檢測(cè)片段在凝膠上的位置就直接反映在了轉(zhuǎn)印膜上。RNA樣品則可直接在變性條件下電泳分離，然后轉(zhuǎn)印并交聯(lián)固定。
2、制備探針：探針是指一段能和待檢測(cè)核酸分子依堿基配對(duì)原則而結(jié)合的核酸片段。它可以是一段DNA、RNA或合成的寡核苷酸。探針需要被標(biāo)記上可直接檢測(cè)的元素或分子。這樣，通過(guò)檢測(cè)與轉(zhuǎn)印膜上的核酸分子結(jié)合的探針?lè)肿?，就可知道被檢測(cè)的核酸片段在膜上的位置，也就是在電泳凝膠上的位置，也就知道了它的分子大小。
3、雜交：在雜交前先進(jìn)行預(yù)雜交，封閉膜上非特異的DNA結(jié)合位點(diǎn)，以降低非特異性雜交。正式雜交時(shí)，由于轉(zhuǎn)印在膜上的核酸分子已經(jīng)是變性的分子，所以核酸雜交過(guò)程中只需變性標(biāo)記好的探針，再讓探針與膜在特定的溫度下反應(yīng)，然后洗去未結(jié)合的探針?lè)肿蛹纯伞?br />
4、檢測(cè)：檢測(cè)的方法依標(biāo)記探針的方法而異。用放射性同位素標(biāo)記的探針需要放射自顯影來(lái)檢測(cè)核酸片段在膜上的位置；而如果是用生物素等非同位素方法標(biāo)記的探針則需要用相應(yīng)的免疫組織化學(xué)的方法進(jìn)行檢測(cè)。
二、液相核酸分子雜交
液相核酸分子雜交，是一種研究最早且操作復(fù)雜的核酸雜交類型，在過(guò)去的30年里雖被應(yīng)用，但總不如固相雜交那樣普遍，主要原因是雜交后過(guò)量的未雜交探針在溶液中除去較為困難，誤差也較高。
常用的兩種固相核酸分子雜交技術(shù)
1 .Southern Blot
原理：將待檢測(cè)的DNA分子用/不用限制性內(nèi)切酶消化后，通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳進(jìn)行分離，繼而將其變性并按其在凝膠中的位置轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素薄膜或尼龍膜上，固定后再與同位素或其它標(biāo)記物標(biāo)記的DNA或RNA探針進(jìn)行反應(yīng)。如果待檢物中含有與探針互補(bǔ)的序列，則二者通過(guò)堿基互補(bǔ)的原理進(jìn)行結(jié)合，游離探針洗滌后用自顯影或其它合適的技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)，從而顯示出待檢的片段及其相對(duì)大小。
用途：檢測(cè)樣品中的DNA及其含量，了解基因的狀態(tài), 如是否有點(diǎn)突變、擴(kuò)增重排等。
2. Northern Blot
原理：在變性條件下將待檢的RNA樣品進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳，繼而按照同Southern Blot相同的原理進(jìn)行轉(zhuǎn)膜和用探針進(jìn)行雜交檢測(cè)。
用途：檢測(cè)樣品中是否含有基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物(mRNA)及其含量。
